分享好友 检验技术首页 频道列表

微生物生长量的测定,快来看看你做的对不对!

2018-11-30 00:007160
 微生物体积很小,测定个体生长很困难,也没有太大意义。通常微生物的生长是指群体的生长,微生物生长量是指在一定条件下微生物经过培养后群体的生长量。

 

测定生长量的方法有许多种,可以直接测量培养物的体积或质量,也可以通过测量细胞组分含量或浊度等指标来间接获得微生物的量。

 

(一)直接法

1.测体积

它是一种较为粗放的方法,通常用于初步的测定。

操作方法如下:将待测培养液放在刻度离心管中作自然沉降或进行一定时间的离心,然后观察沉降物的体积。

 

2.称干重

采用离心法或过滤法测定,一般干重为湿重的10%-20%,一个细菌一般重10-12

~10-13g。

 

离心法:将待测培养液离心,再用清水洗涤离心1~5次后干燥,可用105℃、100℃或红外线烘干,也可在较低的温度(-80℃或-40℃)下进行真空干燥,然后称干重。

 

过滤法:如为丝状真菌可用滤纸过滤,如为细菌可用乙酸纤维膜等滤膜进行过滤。过滤后,细胞可用少量水洗涤,再真空干燥(-40℃以下),称干重。一般在液体培养基中,细菌的浓度的数量级大约为108CFU/mL, 100 mL培养物可获得10 mg ~300 mg干重的细菌。

 

(二)间接法

1.代谢指标法

微生物生长过程中伴随着的物质合成与利用,因此很多代谢指标与细菌生长量相关,这些指标可用作生长测定的相对值。

 

大多数细菌的含氮量约为干重的12.5% ,酵母菌约为7.5% ,霉菌约为6.0%.总氮在细胞粗蛋白中的含量也较为稳定。因此,培养物含氮量可以近似反应生长量。含氮量的测定方法有很多,常用凯氏定氮法。此法适用于细胞浓度较高的样品,操作过程较繁锁。

 

微生物新陈代谢过程中离不开碳元素。测定培养物含碳量的方法如下:将培养物混入1ml水或无机缓冲液中,用2 mL2%重铬酸钾溶液在100 ℃下加热30 min,冷却后,加水稀释至5 mL,在580 nm波长下测定光密度值(用试剂作空白对照,并用标准样品作标准曲线),即可推算出生长量。

 

微生物细胞内的其他成分,如磷、DNA、RNA、ATP和N-乙酰胞壁酸等的含量,以及产酸、产气、产二氧化碳(用标记葡萄糖作基质)、耗氧、黏度和产热等指标,也都可以用于生长量的测定。

 

2.比浊法

微生物在液体培养基中生长,由于个体体积和细胞数量的增加,引起培养物混浊度的增高。通过测定培养物的浊度可以近似推断其生长量。

 

比浊法通常采用McFarland比浊管,用不同浓度的氯化钡与稀硫酸配制成的10支试管,其中形成的硫酸钡有10个浓度梯度,分别对应10个相对的细菌浓度(预先用相应的细菌测定)。某一未知浓度的菌液在透射光下用肉眼与某一比浊管进行比较,如果两者的浊度相当,即可目测出该菌液的大致浓度。如要精确测定培养物的浊度,则需要用分光光度计进行。在可见光的450 nm -650 nm波长内均可测定。





反对 0
举报 0
收藏 0
打赏 0
什么情况下实验室能力验证?怎么做?
 一、什么叫能力验证?能力验证是指利用实验室间比对来确定实验室检测/校准能力的活动。它是确保实验室维持较高的校准和检测……(世界食品网-www.shijieshipin.com)

2023-07-313324

仪器设备期间核查完整内容汇总
 仪器设备是否需进行期间核查,应根据在实际情况下出现问题的可能性、出现问题的严重性及可能带来的质量追溯成本等因素,合……(世界食品网-www.shijieshipin.com)

2023-07-312970

实验室内审
 内部审核,也称为第一方审核,由组织自己或以组织的名义进行,审核的对象是组织自己的管理体系,验证组织的管理体系是否持……(世界食品网-www.shijieshipin.com)

2023-07-313712

微生物培养的污染因素及预防方法
 随着现代生物学研究的发展,微生物培养成为了重要的实验手段之一。然而,在进行微生物培养过程中,存在着许多污染因素,这……(世界食品网-www.shijieshipin.com)

2023-07-313103

【干货分享】实验结果应该保留几位有效数字?
 有效数字及其有效数字的保留 1 .有效数字的定义 我们把通过直读获得的准确数字叫做可靠数字;把通过估读得到的那……(世界食品网-www.shijieshipin.com)

2023-07-312130

实验室能力验证常见不满意结果的原因分析
 能力验证:能力验证是一种合格评定活动,在认可活动中扮演着重要的角色,其已成为认可机构对检测、校准和检验机构在认可活……(世界食品网-www.shijieshipin.com)

2023-07-311500

微生物检测中的质谱技术
 提到“微生物质谱”,不妨把这一词组拆开来看,“微生物”大家都懂,就不多说了,那么“质谱”到底是什么?小编带大家来了……(世界食品网-www.shijieshipin.com)

2023-07-311860

洁净室洁净区找茬
 墙体与地面外墙要求表面整洁、平整,典型的建筑材料有砖混墙、剪力墙、钢结构等,并具有外保温层。内墙表面应坚固光洁、平……(世界食品网-www.shijieshipin.com)

2023-07-311526