教你一招丨需氧培养法

 在日常检测中，大多数的细菌、放线菌、霉菌培养法均为需氧培养。培养基接种微生物后放于35 ℃~37 ℃或25℃恒温培养箱(或水浴箱)中，培养18 h-24h或3d-5d,大多数菌能达到指数期，可以进行计数及鉴定。需氧培养法按培养基的状态来分，可分为三类。

一、固体培养法

固体培养法是指将微生物接种在固体培养基上生长繁殖的方法，固体培养基包括琼脂平板和琼脂斜面。琼脂平板用于菌落计数和分离菌落，琼脂斜面用于微生物形态观察或保藏，接种后的平板倒置(防止冷凝水滴落到生长的菌体上),堆叠(一般不超过6个平皿)放于培养箱中，培养皿之间和培养皿距离箱壁至少要25 mm,保证空气循环，这时，对各个点的温度要进行验证。为防止培养基过分干燥，可用塑料袋松散的包一下，也可以在培养箱内放一杯水防止培养基干瘪。斜面试管放于试管架上，然后放置于培养箱中进行培养。除此两种方法属固体培养法外，还有以下几种。

(一)插片培养法

(1)用高压灭菌后冷却到50℃左右的培养基制备平板，凝固后用接种环挑取菌悬液划线接种。
(2)将灭过菌的盖玻片以450斜插入固体培养基中，紧靠接种物，使菌体沿盖玻片生长，置28 ℃~32 ℃培养箱培养3d-5 d。
(3)培养完毕后，取出盖玻片放在载玻片上，直接用低倍镜观察放线菌的自然生长个体形态。也可在载玻片上滴一滴0.1%的美蓝水溶液，再放上插片，用高倍镜观察孢子结构。

(二)载玻片培养法

(1)在培养皿底部铺一张圆形滤纸，滤纸上放上一根“U"形载玻片搁架，其上放一块干净的载玻片和两片盖玻片，盖上皿盖，外用纸包扎，高压灭菌后，烘干备用。
(2)将经过高压灭菌冷却到50 ℃左右的培养基，倒入另外的无菌培养皿中制成2mm厚的平板，凝固后用无菌刀切成1cm2的方块，放置于载玻片上左右各一块。
(3)琼脂块的四周用接种针接种上霉菌孢子，而后盖上盖玻片，压紧琼脂块，在滤纸上加2 ml -3 ml。无菌水或20%无菌甘油，保湿培养，培养好后，可直接用低倍镜观察

(三)透析膜培养法

透析膜浸在试管中高压灭菌后，用无菌的镊子取出后平铺在琼脂平板上，在膜上用接种工具点接上菌种，盖好皿盖后，进行培养。也可直接把透析膜放在液体培养基里浸泡后，直接铺在平皿中，灭菌后进行点种微生物，再盖上皿盖进行培养。

(四)其他

应用在酿造工业上的培养瓶培养，盘曲、帘子曲培养，厚层通风培养。

二、液体培养法

液体培养法是利用液体培养基对微生物进行培养的方法，可分为静止培养法和深层培养法。

(一)静止培养法

静止培养法是指在接种后培养液静止不动进行培养。一般包括试管法和三角瓶浅层培养法，培养时盛液体培养基的螺口瓶或螺口试管的盖不要拧紧，松散盖上即可，放于试管架上，然后放置于培养箱或水浴锅中进行培养。在静置状态下，三角瓶内的通气状况与其中的装液量和瓶口棉塞的通气程度对瓶内微生物的生长速度和生长量有很大的关系。一般情况下，接种量越大，培养时间越长，生长量越高。刚接种的时候，菌体需适应培养基环境，故繁殖较慢，然后进入快速生长期，生长速度呈指数增长，到一定数量后，培养基的营养成分消耗殆尽，次生产物增多，菌体生长速度减缓。

(二)通气深层培养法

1.振荡(摇瓶)培养法

此法最早是荷兰人A. J. Kluyver等在1933年使用，即将三角瓶内培养液用8层纱布包住瓶口，以取代一般的棉花塞，同时降低瓶内的装液量，把它放置于摇床上有节奏的振荡，以该法提高液体溶氧量的目的。

该法可以对微生物进行通气深层培养，通过对细菌、酵母等单细胞微生物振荡培养，可以得到均一的菌悬液，常用于菌种的选育及生化试验和发酵试验等。

振荡培养的设备有恒温摇床、摇瓶机等，培养瓶放在里面后，进行振荡培养，瓶口用6层~8层的纱布包扎，瓶内液体不宜过多，防止溅到瓶塞上引起污染。


2.发酵罐培养法

可进行较大液体量的通气培养，有小型发酵罐和大型的发酵罐，小型的发酵罐一般为1L~100 L,大型的容量一般在1m3-500 m3,能够提供培养微生物的营养和氧气，并且有自动控制和记录装置。

三、半固体培养法

利用半固体培养基进行培养的方法，半固体培养基含有一定的琼脂(0.02%-0.3% )，使培养基有一定的黏度，但没有完全固化。培养时，盛半固体培养基的试管放置于试管架上，然后置于培养箱中进行培养。一般用于生化试验。