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沙门氏菌常用培养基的配方及原理!

2020-07-28 00:004180
 沙门氏菌病的病原体,属肠杆菌科,革兰氏阴性肠道杆菌。已发现的近一千种(或菌株)。菌体大小(0.6~0.9)×(1~3)微米无芽胞,一般无荚膜,除鸡白痢沙门氏菌和鸡伤寒沙门氏菌外,大多有周身鞭毛。营养要求不高,分离培养常采用肠道选择鉴别培养基。生化反应对本属菌的鉴别具有重要参考意义。不液化明胶,不分解尿素,不产生吲哚,不发酵乳糖和蔗糖,能发酵葡萄糖、甘露醇、麦芽糖和卫芽糖,大多产酸产气,少数只产酸不产气。VP试验阴性,有赖氨酸脱羧酶。DNA的G+C含量为50~53%。对热抵抗力不强,在60℃15分钟可被杀死。在水中存活2~3周。
 

检测流程

 


 
培养基原理


缓冲蛋白胨水Buffered Peptone Water

用途:用于沙门氏菌、阪崎杆菌前增菌培养。

配方:(g/L)


用法:将各成分加入蒸馏水中,搅混均匀,静置约10min,煮沸溶解,调节pH至7.2士0.2,高压灭菌121℃,15 min。

四硫磺酸盐煌绿增菌液基础(TTB) Tetrathionate Broth base

用途:用于沙门氏菌选择性增菌培养,需加入煌绿和碘液。

配方:(g/L)

亚硒酸盐胱氨酸增菌液(SC)Selenite Cystine Broth

用途:用于沙门氏菌选择性增菌培养。

配方:(g/L)


用法:除亚硒酸氢钠和L胱氨酸外,将各成分加入蒸馏水中,煮沸溶解,冷至55℃以下,以无菌操作加入亚硒酸氢钠和1g/L L-胱氨酸溶液10mL(称取0.1 gL-胱氨酸,加1mol/L氢氧化钠溶液15mL,使溶解,再加无菌蒸馏水至100 mL即成,如为DL-胱氨酸,用量应加倍)。摇匀,调节pH至7.0士0.2。

亚硫酸铋琼脂(BS)(GB4789)

配方:(g/L)


用法:将前三种成分加入300mL蒸馏水(制作基础液),硫酸亚铁和磷酸氢二钠分别加入20mL和30mL蒸馏水中,柠檬酸铋铵和亚硫酸钠分别加入另一 20mL和30mL蒸馏水中,琼脂加入600mL蒸馏水中。然后分别搅拌均匀,煮沸溶解。冷至80℃左右时,先将硫酸亚铁和磷酸氢二钠混匀,倒入基础液中,混匀。将柠檬酸铋铵和亚硫酸钠混匀,倒入基础液中,再混匀。调节 pH,随即倾入琼脂液中,混合均匀,冷至50℃~55℃。加入煌绿溶液,充分混匀后立即倾注平皿。

注:本培养基不需要高压灭菌,在制备过程中不宜过分加热,避免降低其选择性,贮于室温暗处,超过48h会降低其选择性,本培养基宜于当天制备,第二天使用。

XLD培养基XyloseLysineDeso

用途:选择性培养基,主要用于分离志贺氏菌属,亦可用于分离沙门氏菌。

配方:(g/L)


用法:除酚红和琼脂外,将其他成分加入400 mL蒸馏水中,煮沸溶解,调节pH至7.4士0.2。另将琼脂加入600mL蒸馏水中,煮沸溶解。

将上述两溶液混合均匀后,再加入指示剂,待冷至50℃~55℃倾注平皿。

注:本培养基不需要高压灭菌,在制备过程中不宜过分加热,避免降低其选择性,贮于室温暗处。本培养基宜于当天制备,第二天使用。

HE琼脂

用途:用于沙门氏菌的选择性分离培养(GB标准)。

配方:(g/L)


原理:本培养基不需要高压灭菌,在制备过程中不宜过分加热,避免降低其选择性。(按商品培养基说明操作)

 

 

 

生化培养基


三糖铁(TSI)琼脂Triple Sugar Iron Agar

用途:生化培养基,用于肠杆菌科细菌的生化反应筛选

配方:(g/L)


用法:除酚红和琼脂外,将其他成分加入400 mL蒸馏水中,煮沸溶解,调节pH至7.4士0.2。另将琼脂加入600mL蒸馏水中,煮沸溶解。将上述两溶液混合均匀后,再加入指示剂,混匀,分装试管,每管约2 mL~4 mL,高压灭菌121℃10 min或115℃15 min,灭菌后制成高层斜面,呈桔红色。

 

尿素琼脂(pH 7.2)

用途:生化培养基,用于细菌脲酶检测

配方:(g/L)


用法:除尿素、琼脂和酚红外,将其他成分加入400 mL蒸馏水中,煮沸溶解,调节pH至7.2士0.2。另将琼脂加人600mL蒸馏水中,煮沸溶解。将上述两溶液混合均匀后,再加入指示剂后分装,121℃高压灭菌15 min。冷至50℃~55℃,加入经除菌过滤的20%尿素溶液20mL。尿素的最终浓度为2%。分装于无菌试管内,放成斜面备用。

糖发酵管

配方:(g/L)

制法:①葡萄糖发酵管按上述成分配好后,调节pH。按0.5%加入葡萄糖,分装于有一个倒置小管的小试管内,121℃高压灭菌15min 。

②其他各种糖发酵管可按上述成分配好后, 分装每瓶100mL,121℃高压灭菌15min.另将各种糖类分别配好10%溶液,同时高压灭菌。将5mL糖溶液加入于100mL培养基内,以无菌操作分装小试管。

注:蔗糖不纯, 加热后会自行水解者,应采用过滤法除菌。

试验方法:从琼脂斜面上挑取小量培养物接种,于36℃±1℃培养, 一般2d~3d。迟缓反应 需观察14d ~30d 。





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