磷酸氢二钾 5g
多胨 7g
葡萄糖 5g
蒸馏水 1000mL
pH7.0
溶化后校正pH，分装试管，每管1mL，121℃高压灭菌15min。
自琼脂斜面挑取少量培养物接种本培养基中，于36±1℃培养2～5d，哈夫尼亚菌则应在22～25℃培养。滴加甲基红试剂一滴，立即观察结果。鲜红色为阳性，黄色为阴性。甲基红试剂配法：10mg甲基红溶于30mL95%乙醇中，然后加入20mL蒸馏水。
用琼脂培养物接种本培养基中，于36±1℃培养2～4d。哈夫尼亚菌则应在22～25℃培养。加入6%α－萘酚－乙醇溶液0.5mL和40%氢氧化钾溶液0.2mL，充分振摇试管，观察结果。阳性反应立刻或于数分钟内出现红色，如为阴性，应放在36±1℃下培养4h再进行观察。