[实例分享] 应对菌落蔓延，TTC的使用方法

 关于TTC的使用，从刚开始的菌落蔓延，搜索解决办法，了解TTC之后琢磨使用剂量，可以说是花了一段不短的时间。包括对于TTC的使用，也可以说“众说纷纭”，一开始接触的我真的也是不知道怎么去弄，是很头疼的，而且遇到菌落蔓延的吧友还是挺多的。

好了，废话说到这，进入正题：

首先，TTC有毒，不仅毒细菌也毒人，所以使用的时候要小心（其实用别的化学试剂也要小心，不好意思，又说废话了）。接着我个人是配置的0.5%的TTC溶液，你们可以根据个人的需要配置不同浓度。

配置方法：实验室用水（我们用的桶装纯净水）200mL，TTC粉末1.00 g，水不用灭菌，我个人是稍微加热（大概40℃水温这样就完全溶解了），也可以搅拌至完全溶解，然后倒入棕色瓶子，放无菌室静置大概72小时（我个人是放置72小时，不确定24小时或者48小时行不行），此时配置出来的溶液加入空白培养基是养不成菌落的（我觉得这也说明了这东西有毒）。没必要先把水灭菌，也没必要加入PDA培养基里一起121℃灭菌。

使用剂量：我一般是500mL PDA培养基 配 2.0mL 的 0.5%TTC 溶液，在无菌室里操作，在倒平板之前加，摇晃均匀就可以，本人亲测，对解决菌落蔓延问题非常有效，而且也不会有明显的抑制细菌生长导致实验不准确的情况。

温馨提醒：放置条件：避光低温保存（我是室温保存的，化验室经常开空调，大概在20-25℃左右，（下班了就25-30℃左右），目前放置了一个多月，没有出现粉红色。我查找资料的时候，说是溶液呈粉红色就要从新配置了。

 

小结

目的 : 为便于区别样品颗粒与菌落，可在每 100mL 琼脂培养基中加入1 mL、 0.5% 的 TTC 溶液，如有细菌存在，培养后菌落呈红色。

配制 : TTC 0.5g，蒸馏水 100mL，溶解。定性滤纸过滤，滤液置于棕色瓶中，4°C冰箱冷藏 。

灭菌 : 配好的0.5% TTC，  过滤除菌后置于棕色瓶中4°C冰箱冷藏 ; 或按预计使用量分装入小管，115℃高压灭菌 20min 、121度高温灭菌15min，过后4°C冰箱冷藏。

使用 : 临浇平板前，再按前述比例将TTC与培养基混合摇匀。

 

只是分享经验，数据结论仅代表我自己亲身试验得出的较合理结论，不具备权威性哦！

 

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