试剂配制
20g/l的铁氰化钾溶液：称取1g铁氰化钾，先用少量的水溶解后再定容至50ml。
100g/l的氢氧化钠溶液：称取10g氢氧化钠，加水溶解后定容至100ml。
碱性铁氰化钾：将上述的5ml铁氰化钾和100ml的氢氧化钠混合均匀后备用（现用现配）。
0.1mol/l的盐酸溶液：准确移取8.5ml浓盐酸，加水稀释至1000ml。
2.0mol/l乙酸钠溶液：称取27.1g乙酸钠，用水溶解后定容至100ml
混合酶溶液：称取1.76g木瓜蛋白酶和1.27g淀粉酶，加水定容至50ml,涡旋混匀后冷藏密封保存，临用时现取。
1.称取5g（精确至0.01g)固体试样或10g液体试样于带塞子的锥形瓶中，加60ml0.1mol/l的盐酸溶液，充分摇匀后塞上塞子，高压灭菌锅中121℃，30min.冷却至常温后摇匀。
2.用2.0mol/l的乙酸钠溶液调节pH至4.0左右，准确移取2.0ml混合酶溶液，摇匀后放入培养箱37℃培养16h。
3.将溶液用漏斗全部移至100ml容量瓶中，定容至刻度，摇匀后过滤。
试液制备
1.准确移取滤液2.0ml至10ml的离心管中，加入1.0ml的碱性铁氰化钾溶液，涡旋混匀后，加入2.0ml的正丁醇，涡旋1.5min后离心五分钟。
2.吸取上层经0.45μm有机微孔滤膜过滤，取滤液2ml放入棕色进样瓶中待测。
到这一步维生素B1的前处理就完成了，特别要注意以下几点：
1.混合蛋白酶和碱性铁氰化钾要现用现配，曾经小编这里就出现过蛋白酶密封放冰箱三天就会变臭，可能是因为酶活性高，容易变质。
2.一定不要忘记加1.0ml碱性铁氰化钾，否则不出峰。
3.离心之前一定要涡旋1.5min,或者手动摇匀1.5min，使维生素B1充分提取出来。
4.拔针头时注意安全，使用完后将针头盖好，保护他人安全。
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