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如何估计悬液中的细菌浓度?

2022-07-09 00:009200
 在我们日常的检测工作和进行的某些实验中,经常会遇到需要预估细菌悬液的细菌浓度这样的问题,又是后我们需要精确计数菌液浓度,会用到血球计数板来进行计数;但有时我们只需要一个比较粗略的估计值即可,这里我推荐大家使用麦氏比浊法。

 

麦氏比浊管是McFarland发明的一种用于微生物比浊的不同浊度的标准浊度管。具体的配制方法是根据硫酸和氯化钡的比例来定的,有表可查,这样不同比例生成的硫酸钡沉淀的浓度不同,且都有定值。麦氏比浊管的配比如下:

这是传统的麦氏比浊管的配制方法,目前也有市售的商品化产品,不需要自己配制,并且还有由乳胶粒子悬浮液制成的麦氏比浊管,与传统的麦氏比浊管相比,保存时间更长也更稳定。但麦氏比浊管具体应该怎ô使用呢?

 

操作方法:

1、轻摇标准试管。

2、无菌操作将被测定的肉汤培养物加到与标准管相同直径(大小)的无菌试管中。

3、以无菌操作向被测定试管加入无菌生理盐水(NaCl),直到浓度与所要求的标准管的浓度相同。

4、直接用眼睛看(需要经验,误差较大)。

5、找张白纸,打上平行直线,然后观察读数(如图示,利用光在不同浓度液体折射不同)。

 

注意事项:

1、如果测定的肉汤培养物不澄清,由培养物的值减去δ接种培养基的值来校正细菌浓度。4号管(肉汤培养物)-1号管(孵育过的δ接种的肉汤管)=3号管(校正读数)。

2、如果肉汤颜色很深,把δ接种试管放在标准管的后面读数即可。

3、测定好的细菌,最好做一下梯度稀释涂布计数。

4、此浓度是对应的大肠杆菌的浓度,如果是其他细菌,会有一定的差别,但通常差别都在一个数量级之内,适合于普通实验。

5、此种方法测定的准确性不是很高,如果是对细菌数量要求较精确的,请用紫外分光光度计。

6、麦氏比浊液应放室温暗处保存,用前混匀,有效期为6个月。应用时为了准确也可以使用比浊仪但一定要防止麦氏浊度标准管δ摇匀或已过期失效。

在微生物学检验中,麦氏比浊法常作为细菌鉴定、实验配制菌液时大致判断菌液浓度的一种方法,通常认为,如将配菌液浓度配成0.5麦氏比浊管时,相当于1.0×108细菌数/mL,由于方法本身就是一种估计的方法,所以尽管不同细菌大小差异很大,但除了真菌孢子,细菌的差别不大,结果不会有影响。

 

另附孢子菌悬液制作方法:

菌种活化

将保藏菌接种在PDA斜面培养基试管中,培养7d~14d,使生成大量孢子。δ制备孢子悬液时,不得拔去棉塞。ÿ打开1支只供制备1次悬液,ÿ次制备孢子悬液必须使用新培养的ù菌孢子。

 

孢子悬液制备

在上述PDA斜面培养基中加入少量无菌蒸馏水,用无菌接种环轻轻刮取表面的新鲜ù菌孢子,将孢子悬液置于250mL锥形瓶内,然后注入40mL洗脱液。

锥形瓶中加入直径5mm的玻璃珠10粒~15粒与孢子混合,具塞后置水浴振荡器中不断振荡使成团的孢子散开,然后用单层棉纱布过滤以除去菌丝。将其装入灭菌离心管中,用离心机分离沉淀孢子,去上清液。再加入40mL洗脱液,重复离心操作3次。制成浓度为(0.8~1.2)×106spores/mL的ù菌孢子悬液。若需要精确计数,则可以用改良察氏液体培养基稀释孢子悬液,用血球计数板计数。孢子悬液应在当天使用,若不在当天使用应在 3℃~7℃保存,并尽量在4d内使用。







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