高压蒸汽灭菌锅是微生物实验中必不可少的设备，在操作过程中常常会遇到灭菌失败的情况，或是灭菌锅内样品不能全部有效灭菌。今天小编就为大家介绍一下高压蒸汽灭菌锅在使用过程中的几点注意事项，希望能帮助大家做到有效灭菌。
1.热传递时间延迟
对于高压蒸汽灭菌锅来说，装载的物品数量越多，到达121℃的时间也越长，灭菌时间不够，导致灭菌不良。即热量传递会有时间延迟，高压蒸汽灭菌锅显示的温度为高压蒸汽灭菌锅腔体内温度，但锅内装载物品的达到设定温度要有一段时间的延迟，这样即会导致灭菌样品的有效灭菌时间不够。
因此，建议高压蒸汽灭菌锅内装载物品最多不超过锅容积的75%，如果装载量大的话要适当加长灭菌时间，大量液体灭菌时也需加大灭菌时间。
2.灭菌物品大小适宜、布局合理
为了达到灭菌的目的，锅内待灭菌物品应不要太紧太满，以利于蒸汽流通。体积过大蒸汽就不易穿透物品。最下层物品摆放尽量稀疏，因下层蒸汽量相对少，分压不够，往往造成灭菌不完全。因此摆放时注意上下交错叠放，使留有较多空隙，利于蒸汽穿透。如需要对较小物品灭菌时，应事先装在容器中，所选容器也应尽量小且浅，且有通气孔，若用过大、过深及不带孔的容器，蒸汽不易穿透。同时灭菌物品应尽量垂直放不要平放，切勿挤压。
3.灭必须充分排除冷空气
压力蒸汽灭菌锅内蒸汽的温度不仅与压力有关，而且与蒸汽的饱和度有关。灭菌锅内冷空气未排尽时，即使蒸汽压力达到要求，温度也上不到相应的高度，而且还影响高压蒸汽穿透被灭菌物品的能力。
如使用灭菌袋时，不要封口，在袋内装入100ml左右的水，以免袋内有空气残留；袋盖的密封性容器灭菌时打开盖子，或拧松盖后再灭菌。
4.灭菌物卸载及检查
1.取出灭菌物，检查包装完整性；
2.指示带或化学指示卡是否能达到灭菌要求；
3.取出的灭菌物掉在地上、放错地方、沾水的，湿包视为受污染；
4.登记灭菌器使用记录表。
5.灭菌物登记
1.无菌物品应该和非无菌物品区分开来，分别放置，避免混淆；
2.各种消毒标记明确、完整、必须有名称、有效日期、责任人、核对者；标记不清、记录不全，均不得发放；
3.经高压灭菌后，无菌物品在传递过程中应保持清洁、干燥、无污染，消毒室车子（分为灭菌物品车、清洁物品车）每天用消毒液擦拭，并有标志。
6.无菌物品的存储
1.无菌室通风干燥，应向外排风。
2.按要求进行无菌室内环境、柜子、存放架的清洁及消毒；
3.进入无菌室应由相对固定专职人员，入室前要洗手、戴口罩、换鞋，严格无菌操作规程，其他人员不得入内。
4.无菌物品摆放：
A.与天花板的距离≥50cm，便于空气流通，远离出风口及消防喷头；
B.与地面距离≥20cm，降低灰尘污染，易于清洁；
C.与墙距离≥5cm，避免靠近墙体滋生细菌；
5.无菌物品应分类放置，严格定位、标记清楚，按灭菌日期先后顺序使用；
6.每日巡检无菌包的灭菌日期及保存情况，过期或者受潮要重新包装灭菌。
7.无无菌物品发放
1.核对物品名称与实物是否相符；
2.标签有效期是否与实物包装材料相符；
3.双人核对后发放；
4.无菌物品一旦发出，严禁原路径返回。