免疫蛋白印迹（Western blot）简介

一、Western blot 技术起源

1975年，Edwin Southern发明了DNA杂交检测技术，命名为Southern blot。1977年，James Alwine、David Kemp和George Stark发明了RNA杂交检测技术，命名为Northern blot。两年后位于美国斯坦福大学的George Stark发明了将蛋白从电泳凝胶上转移到活化纤维素上的技术，随后Harry Towbin发展出更快速、简单的电转技术。1981年Neal Burnette正式将这一技术命名为“Western blot”。

二、Western blot 用来干什么？

（一）确定目的蛋白的表达情况

这是Western blot最常规的应用，如检测患者的标本与正常人的标本、实验条件处理后细胞与未处理的对照细胞之间目的蛋白的表达变化情况，通过灰度分析可以确定目的蛋白表达水平是升高还是降低。

（二）研究蛋白间的相互作用

这是与免疫共沉淀（co-immunoprecipitation，CO-IP）技术相结合的一种检测蛋白质之间相互作用的常用方法。通过CO-IP技术将相互作用的蛋白质复合体分离出来后进行凝胶电泳，然后利用相互作用的蛋白质的特异性抗体进行检测。适用于对已知的蛋白质的相互作用进行检测，不适用于检测一个蛋白质未知的相互作用蛋白；也可以用于蛋白质-DNA、蛋白质-RNA相互作用的后续分析。

（三）确定目的蛋白的细胞定位

通过分别提取细胞不同部位的蛋白质，如膜蛋白、胞浆蛋白核蛋白或线粒体蛋白等，将分离出来的不同部位的蛋白质进行Western blot检测可以分别检测目的蛋白在不同部位的表达情况。

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