单相琼脂扩散试验

原理一种定量试验，将一定量的抗体混合于琼脂内，倾注于玻片上，凝固后，在琼脂层上打孔，再将抗原加入孔中，使其向四周扩散。抗原抗体复合物形成的沉淀环直径与抗原的浓度成正比。如事先用不同浓度的标准抗原制成标准曲线，则未知标本中的抗原含量即可从标准曲线中求出。本试验主要用于检查标本中各种免疫球蛋白和血清IgG含量。
 
材料 
1．抗体：羊抗人IgG单价抗血清。
2．抗原：待检血清。
3．3％生理盐水琼脂、生理盐水、载玻片、直径３mm打孔器、小三角烧瓶、毛细滴管、湿盒。
 
方法 
1、制备含抗体的琼脂板
取羊抗人IgG单价抗血清一瓶（效价1：80），量取0.3ml于一小三角烧瓶中，加生理盐水11.7ml（40倍稀释混匀，置56℃水浴 中恒温2~3分钟）。
取3%生理盐水琼脂一管，隔水加热使溶，然后置56℃水浴 中，待琼脂温度降至56℃时，立即加入等量1：40稀释抗血清，迅速轻轻混匀，勿使产生气泡，迅速倾入载玻片上，每片3.5ml，待凝固后打孔。如下图所示。
  
2、稀释待检血清
将待检血清用生理盐水作40倍稀释，
3、打孔、加样
每份检样加两孔，加满（但不要溢出），加样时毛细滴管尖端不要划破琼脂。
4、温育
将琼脂板置搪瓷盒，垫湿纱布或海绵以防干燥，37℃恒温箱 24h。
 
结果观察与分析 
测量并求出每份检样两孔的沉淀环平均直径，按照标准曲线求出IgG含量。