2012年2月中旬,美国消费者倡导组织公共利益科学中心(CSPI)公布了一份声明,其中声称,在可乐饮料中发现高含量的化学成分4-甲基咪唑。
4-甲基咪唑是一种存在于焦糖剂中的化学物质。它是在生产焦糖色素时产生的。焦糖色素能使可乐饮料变成棕褐色。在实验中发现,4-甲基咪唑能导致动物长肿瘤,有可能给人体带来致癌风险。
世界卫生组织允许在食物中添加含有4-甲基咪唑的焦糖色素,且对于4-甲基咪唑的剂量有所界定,即每千克不能超过200毫克。中华人民共和国标准GB 8817-2001《食品添加剂 焦糖色(亚硫酸铵法、氨法、普通法)》中规定,4-甲基咪唑在液体食品中含量小于0.02%,即每千克液体中4-甲基咪唑含量小于200毫克,与世界卫生组织要求相同。
在标准GB 8817-2001《食品添加剂 焦糖色(亚硫酸铵法、氨法、普通法)》中,要求实验中所用试剂和仪器设备除特别注明外,均采用分析纯试剂、蒸馏水或去离子水及实验室常用仪器设备。4-甲基咪唑的测定主要采用薄层色谱法来进行检测。
薄层色谱法具有快速、简单等特点。但是相比液相或气相色谱来说,存在定性错误的可能性,如果被测物质和标准物质不是同一个物质,而他们的保留时间一致,则会产生定性错误。因此,很多地方选择使用液相色谱来检测4-甲基咪唑,并出台了相应的地方标准。下面将根据河北省地方标准DB13/T 1116-2009《焦糖色中的4-甲基咪唑的测定 高效液相色谱法》对检测方法做介绍。
6分析步骤
6.1 样品处理 准确称取3g样品(精确至0. 001 g),加15mL水溶解,移入250 mL分液漏斗中,加100 g/L碳酸钠溶液15 mL,加三氯甲烷一无水乙醇萃取液60 mL,剧烈振摇5 min。静置分层后,将有机相移入另一分液漏斗中,水相再按同样方法萃取一次,合并有机相;用100 g/L碳酸钠溶液洗涤提取液3次,每次30mL。然后将有机相通过无水硫酸钠滤入旋转蒸发瓶中,50℃浓缩至近干,取下,以水溶解残渣并定容至10mL,经0.45μm微孔膜过滤后供HPLC分析。
6. 2测定
6.2.1 HPLC参考条件
分析柱:C18, 4. 6 mm×250 mm粒度5 μm。
流动相:甲醇: 0. 05 mol/L磷酸二氢钾缓冲液((pH 3. 5,含0. 1%庚烷磺酸钠)=5: 95。
波长:210nm。
流速:1. 0 mL/min。
6.2.2标准曲线:分别进标准系列溶液各10 μL,进行HPLC分析,然后以峰面积为纵坐标,以4一甲基咪唑的含量为横坐标,绘制标准曲线。
6.2.3试样测定:吸取6. 1处理后的试样溶液10 μL进行HPLC分析,测定其峰面积,从标准曲线查得测定液中4一甲基咪唑的含量
7结果计算
试样中4一甲基咪唑的含量按下式计算:
式中:
X一试样中4一甲基咪唑的含量,单位为毫克每千克(mg/kg) ;
c一由标准曲线上查得进样液中4一甲基咪唑的量,单位为微克每毫升(μg/mL) ;
V一试样稀释液总体积,单位为毫升(mL) ;
m一试样质量,单位为克(g) ;
计算结果保留两位有效数字。
在使用液相色谱检测时,要求必须使用符合中华人民共和国标准GB 6682-2008的一级水。其他各种标准溶液的配置最少需要用到二级水。瑞枫特别提供Direct-Pure EDI与PURIST的组合套装,可以提供高纯水及超纯水,满足全方位的实验室用水需求。Direct-Pure EDI高纯水系统选用Siemens公司的EDI,以自来水为进水,提供稳定优质的高纯水,产品达到同类产品先进水平。PURIST系列超纯水系统,精致小巧,使用简便;它以纯水为进水,生产超纯水。水质超过或达到GB以及ASTM、CAP、CLSI的一级水标准。该组合套装,可以保证用户在使用中用水无忧。瑞枫纯水系统已通过FCC、CE等多种认证,同时有专业的验证工程师,提供所需的验证服务支持,以及通过各种标准所需的3Q认证,有助于协助用户通过GMP、GLP等体系认证,让用户在使用高品质产品的同时,享受到专业周到的服务。
为更好地保护HPLC仪器,一般上样前需将溶液预先过滤,除掉溶液中颗粒及微生物,防止色谱柱堵塞、损坏泵等情况发生,从而保证仪器的操作性能及延长仪器使用寿命。为此,瑞枫提供PES、PTFE、Nylon、MCE等多种针头式过滤器,适用于各种有机相及水相的样品过滤。
据专家声称,虽然4-甲基咪唑有比较大的危害性,但只要它是正规食品添加剂焦糖中的物质,含量在允许的范围内,那么对人体将不会有太大的损害。按照人们正常消费水平,如果4-甲基咪唑不超出人体每日允许摄入量,则不能得出危害健康的结论。迄今为止,尚未见到食品中4-甲基咪唑导致人体损害的临床报道。