可用于ELISA实验样本有血清、血浆、细胞培养上清、组织匀浆、细胞裂解液、尿液、唾液、脑脊液等。不同的样本类型有不同的处理方法。
5. 组织匀浆
(1) 用预冷的 PBS(0.01M,PH7.4)冲洗组织以除去表面残留的血液或杂质。
(2) 将组织块称重,然后切成尽可能小的碎块,以便充分匀浆。
(3) 加入适量的预冷 PBS(体积取决于组织的重量,9 mL PBS 适用于 1 g 组织,建议使用前立即在 PBS 中加入适量蛋白酶抑制剂),用玻璃匀浆器在冰上或冰浴中充分匀浆。
(4) 将匀浆液吸入离心管中,4℃ 下以 5000×g 离心 5~10 分钟,收集上清液,保存至-20℃或-80℃, 避免反复冻融。
一般来说,由于 ELISA 实验只能检测可溶性蛋白质的含量,因此要求样本应清晰透明并离心除去沉淀物或悬浮物质。为确保实验的准确性,-20℃或-80℃保存的样本应在 1~6个月内完成检测,4℃保存的样本在一周内完成检测。
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