超高保真DNA聚合酶是一类具有极低错配率和高扩增准确性的酶类。它们通过具备3’→5’外切酶活性,能够校正错误掺入的核苷酸,确保DNA序列的忠实复制。其保真度比普通Taq DNA聚合酶高出50倍以上。
这类酶在PCR反应中起着核心作用,尤其在高通量测序等需要高准确性的实验中,超高保真DNA聚合酶成为优选。
1. 高保真性
- 错配率比Taq酶(~2×10⁻⁴)低100-1000倍。
- 依赖 3'→5'外切酶活性 实时校对,切除错误掺入的碱基。
2. 高扩增效率
- 可扩增长片段(如Q5、PrimeSTAR GXL支持20–30 kb)。
- 耐受复杂模板(高GC含量、二级结构)。
3. 热稳定性
- 最适温度通常为72–98°C(如KOD HiFi在100°C下仍稳定)。