产品简介
RIDASCREEN® β-Lactoglobulin（订货号：R4901）ß-乳球蛋白检测试剂盒为竞争性酶联免疫法检测试剂盒，可定量检测水解乳制品，包括低致敏性的婴儿食品中的天然的和经过加工的ß-乳球蛋白。
若需要检测乳清、含奶或含奶粉的饮料，及果汁、葡萄球、啤酒和食品如香肠、沙拉酱、烘焙食品、冰激凌、巧克力和酸奶等重的天然的和经过加工的ß-乳球蛋白，请选择RIDASCREEN®FAST β-Lactoglobulin 快速ß-乳球蛋白检测试剂盒（订货号：R4902）。
若需要检测食品样品中含有的酪蛋白或酪蛋白酸盐，请选择RIDASCREEN®FAST Casein 快速酪蛋白检测试剂盒（订货号：R4612）。
试剂盒中含有酶联免疫检测所需的所有试剂，包括标准品。
试剂盒足够进行96次检测（包括标准测定）。
定量分析需要使用微孔板酶标仪。
样品处理： 均质和提取
检测时间： 样品制备（以10个样品为例）.................约30分钟
检测过程（孵育时间）........................2小时45分钟
检测限： 0.115 ppm ß-乳球蛋白
定量限： 5 ppm ß-乳球蛋白
回收率： 约130 %
特异性： 通过与相应物质的交叉反应确定。
ß-乳球蛋白......................................................100 %
α-, β-, κ-酪蛋白.................................................< 1 %
α-乳白蛋白.......................................................< 1 %
牛血清白蛋白...................................................< 1 %
RIDASCREEN® β-Lactoglobulin 10-07-29 3
1. 用途
RIDASCREEN® β-Lactoglobulin（订货号：R4901）ß-乳球蛋白检测试剂盒为竞争性酶联免疫法检测试剂盒，可定量检测水解乳制品，包括低致敏性的婴儿食品中的天然的和经过加工的ß-乳球蛋白。
试剂盒使用天然的ß-乳球蛋白进行了校准。试剂盒可检测天然的和经过加工的ß-乳球蛋白及其片段（在奶被加热的过程中，天然的ß-乳球蛋白部分会发生变性。）
2. 概要
牛奶中含有3.2%的蛋白质（2.6%的酪蛋白和0.6%的乳清蛋白）。大约一半的乳清蛋白是ß-乳球蛋白组成的。
牛奶可作为原料成份之一或外源污染物而出现在食品中，从而导致过敏反应。根据2003年11月10日欧盟指令2003/89/EG，食品标签上必须注明牛奶成分。
3. 检测原理
检测的基础是抗原抗体反应。微孔板包被有ß-乳球蛋白（BLG）。加入标准品或样品溶液和ß-乳球蛋白（BLG）抗体。游离的和固定的ß-乳球蛋白（BLG）竞争抗体结合位点（竞争性酶联免疫分析）。在经过洗涤步骤之后，再加入过氧化物酶标记的二级抗体，用于和ß-乳球蛋白（BLG）抗体结合。没有结合的酶标记抗体在洗涤步骤中被除去。在孔中加入底物（过氧化脲）和发色剂（四甲基对二氨基联苯），结合的酶连接物（过氧化物酶标记的二级抗体）将无色发色剂转化为蓝色。加入反应终止液后颜色由蓝色转变为黄色。在450 nm处测量，吸光度值与样品中的ß-乳球蛋白（BLG）浓度成反比。
4. 试剂盒组份
每一个盒中的试剂足够进行96个试验（包括标准测定），盒中的组份如下：
1 x 96孔微孔板（12条每条8孔） 包被有ß-乳球蛋白
6 x ß-乳球蛋白标准品，每瓶1.3 ml 0 ppb（零标准品），10 ppb，30 ppb，90 ppb，270 ppb，810 ppb ß-乳球蛋白水溶液 红色，即用型
1 x ß-乳球蛋白抗体液（1 ml）...............................................................黑色瓶盖 浓缩液
1 x 酶连接物（12 ml）...........................................................................红色瓶盖 过氧化物酶标记的二级抗体
即用型 4 RIDASCREEN® β-Lactoglobulin 10-07-29
1 x 底物（7 ml）.....................................................................................绿色瓶盖 含过氧化脲
1 x 发色剂（7 ml）.................................................................................蓝色瓶盖 含四甲基对二氨基联苯
1 x 反应终止液（14 ml）........................................................................黄色瓶盖 含1 N的硫酸
1 x 缓冲液（100 ml） 样品和抗体稀释缓冲液，以及洗涤缓冲液，均为浓缩液
5. 另需的试剂和设备
5.1. 设备：
− 微孔板酶标仪（450 nm）
− 离心管
− 旋转摇床
− 滤纸
− 水浴锅（60 °C）
− 可调式20 μl - 200 μl 和200 - 1000 μl 微量移液器
5.2. 试剂：
− 蒸馏水
6. 操作者应该注意之事项
本试剂盒建议由经过了培训的实验人员进行操作使用。请严格按照说明书的步骤和要求进行检测使用。
反应终止液含1 N硫酸（R36/38， S2-26）。
7. 储存条件
保存试剂盒于 2 - 8 °C，不要冷冻。
将不用的微孔板放进原锡箔袋中并且与提供的干燥剂一起重新密封储存于2 - 8 °C条件下。
无色发色剂对光敏感，因此要避免直接暴露在光线下。
对过了有效期（见试剂盒外标签有效期）的试剂盒不再提供任何质量保证。
不能交叉使用不同批号的盒中试剂。 RIDASCREEN® β-Lactoglobulin 10-07-29 5
8. 试剂变质的迹象
− 发色剂在使用前颜色变蓝
− 标准品1的吸光度值小于0.8 （A450 nm < 0.6）
9. 样品处理
− 称取2 g奶粉样品于离心管中
− 加入蒸馏水至50 ml，在室温条件下（20 - 25 °C）回旋振荡10分钟。
− 提取液按比例1:20（1+19）用稀释后的样品稀释缓冲液（参见10.1.）稀释（例如：50 μl样品 + 950 μl缓冲液）
− 每孔取50 μl进行检测
10. 检测步骤
10.1. 检测前的准备
使用之前将所有试剂回温至室温（20 - 25 °C）。
缓冲液（样品和抗体稀释缓冲液，以及洗涤缓冲液）为10倍浓缩液。使用前取需要的缓冲液用蒸馏水稀释，稀释比例1:10（1+9）（例如：100 ml浓缩液稀释为1l即用型缓冲液）。稀释后的缓冲液在4 °C条件下可保存4周。
ß-乳球蛋白抗体液（黑色瓶盖瓶子）为浓缩液。由于稀释后的弱稳定性，所以只稀释实际需用量的抗体液。在吸取浓缩液之前，要轻轻的振摇以便充分混均。用稀释后缓冲液（参见上文）以1:11（1+10）的比例稀释抗体液（例如：200 μl浓缩液 + 2.0 ml缓冲液，足够4个微孔板条用）。
10.2. 检测操作
仔细洗板非常重要。避免在操作过程中微孔出现干燥。
1. 将足够标准品和样品检测所需数量的孔条插入微孔板架，均做两个平行实验，记录下标准品和样品的位置。
2. 将50 μl标准品及处理好的样品溶液加到相应的微孔中，均做两个平行实验
3. 向每一个微孔中加入50 μl稀释后的ß-乳球蛋白抗体液（参见10.1.），充分混合，在室温条件下（20 - 25 °C）孵育2小时。
4. 倒出孔中的液体，将微孔板架倒置在吸水纸上拍打（每轮拍打3 次）以保证完全除去孔中的液体。每孔加入250 μl 稀释后的洗涤缓冲液（参见10.1.）洗涤微孔。上述操作重复进行两遍。 6 RIDASCREEN® β-Lactoglobulin 10-07-29
5. 然后向每一个微孔中加入100 μl酶连接物溶液，充分混合，在室温条件下（20 - 25 °C）孵育30分钟。
6. 倒出孔中的液体，将微孔板架倒置在吸水纸上拍打（每轮拍打3 次）以保证完全除去孔中的液体。每孔加入250 μl 稀释后的洗涤缓冲液（参见10.1.）洗涤微孔。上述操作重复进行两遍。
7. 向每一个微孔中加入50 μl 底物和50 μl发色剂，充分混合后在室温（20 - 25 °C）条件下暗处孵育15分钟。
8. 向每一个微孔中加入100 μl 反应终止液，充分混合。在加入反应终止液后10 分钟内于450 nm 处测量吸光度值。
11. 结果评估
请使用R-Biopharm德国拜发公司专门为RIDASCREEN® 系列产品设计的应用软件RIDA® SOFT Win（订货号：Z9999）来进行结果分析。
关于标准曲线请参看试剂盒中附带的质保证书。
根据从校正曲线的吸光度值得到ß-乳球蛋白为μg/kg（ppb）。此浓度必须乘以稀释倍数500。然后ß-乳球蛋白的浓度被换算为mg/kg（ppm）。
计算举例：
从校正曲线上读出检测结果为150 ppb ß-乳球蛋白。在乘以500的稀释倍数后，得出被测样品中ß-乳球蛋白的含量为75000 μg/kg （75 ppm）。
备注：
若检测结果低于试剂盒检测限，食品样品中还可能含有其他牛奶中的成份如酪蛋白和乳糖。
建议
为使检测结果更为有效：
- 如果样品的吸光度值小于0.4，须继续稀释并重新检测（！进行结果分析时必须考虑后增加的稀释倍数！）
- 对每个样品均做两个平行实验
- 应使用阴性和阳性（人工添加）样品。
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